Hisztaminszint csökkentése enzimekkel az emberi bőrben
A hisztamin kulcsszerepet játszik a gyulladásos folyamatok elindításában, többek közt a pikkelysömörhöz, halbőrűséghez és további viszketéssel járó klinikai esetekhez is köthető. Jelenleg elérhetőek antihisztamin tartalmú készítmények, melyek a hisztamin receptorok blokkolásával fejtik ki hatásukat, valamint szteroid alapú, immunszupresszív szerek, melyek hosszú távon mellékhatásokat okozhatnak, illetve sportolók számára korlátozottan alkalmazhatók.
A pályázók célja egy olyan alternatív kezelés kidolgozása, amely csökkenti a viszketést kevesebb mellékhatással. Ehhez transzdermális hidrogélbe ágyazott, hisztamint lebontó rekombináns enzimeket alkalmaznak a bőr hisztamin-koncentrációjának csökkentésére. Vizsgált ható-anya-gaik között szerepelt a humán DAO (Diamin-oxidáz) és a HNMT (Hisztamin-N-Metiltranszferáz) enzim.
A gének cDNS szekvenciáit biológiai adatbázisokból nyerték ki, majd optimalizálták E. coli baktériumban történő expresszióra. A génszekvenciák szintézisét biotechnológiai cégektől rendelték meg. A TERMOSZ Laboratóriumban PCR-rel felsokszorozták a szekvenciákat, vektorba ligálták, majd hősokk módszerrel E. coli baktériumokba juttatták. Az expresszált fehérjéket kipucolták, és PAGE, valamint DAO-ra és HNMT-re specifikus ELISA vizsgálatokkal igazolták jelenlétüket. Az eredmények alapján az enzimek ipari előállításra alkalmasak.
Matematikai modell segítségével elemezték az enzimek bőrön való átjutását. A Szegedi Tudományegyetem Gyógyszerésztudományi Karán végzett kísérletek során liposzómába csomagolták az enzimek egy részét, majd hidrogélbe helyezték őket, és Franz-cellán keresztül vizsgálták átjutásukat. Az epidermiszen átjutott oldatokat ELISA eljárással elemezték.
Eredményeik szerint a DAO egyik formában sem jutott át a bőrön, míg a HNMT képes volt átjutni, akár liposzómában, akár anélkül. A liposzómás forma enyhén jobb átjutást mutatott, de statisztikailag nem szignifikáns mértékben. Az átjutási idő 4-6 óra volt, amely alapján a HNMT potenciálisan alkalmazható krónikus pruritus tünettel járó betegségek (pl. pancreatitis, steatohepatitis, diabetes, dialízis) kezelésére. Következő lépésként a HNMT bőraljában kifejtett hatását szeretnék állati sejttenyészeten vizsgálni.
